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高效液相色谱常用哪些检测器

Date: 2022-04-29 9:00:03 * 浏览: 43

       高效液相色谱(HPLC)法是以高压下的液体为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱仪系统主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号。

       高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。

  紫外检测器

  该检测器适用于对紫外光或可见光有吸收性能样品的检测。其特点:使用面广、(如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)、灵敏度高(检测下限为10-10g/ml)、对温度和流速变化不敏感、线性范围宽、可检测梯度溶液洗脱的样品。

  示差折光检测器

  这一系统通用性强、操作简单,但灵敏度低(检测下限为10-7g/ml),流动相的变化会引起折光率的变化,因此,它既不适用于痕量分析,也不适用于梯度洗脱样品的检测。凡具有与流动相折光率不同的样品组分,均可使用示差折光检测器检测。目前,糖类化合物的检测大多使用此检测系统。

  荧光检测器

  凡具有荧光的物质,在一定条件下,其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此,这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物的测定,其灵敏度很高(检测下限为10-12~10-14g/ml),痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。

      HPLC常用的检测器是紫外检测器。在日常使用过程中紫外检测器主要需要注意检测池和氘灯的使用与维护。

1、检测池:检测池长时间使用可能会造成污染,如果仪器的参比能量(REF ENERGY)正常,测量能量(SMPENERGY)偏低,可能为检测池污染导致,可以对检测池进行清洗。

对检测池零件的进行清洗,一般先采用约1:4的硝酸溶液超声清洗,分别用纯水和甲醇溶液清洗,然后重新组装并将检测池池体推进池腔内,拧紧池板螺丝。注意组装中,池玻璃及垫片一定要放正,以免压碎池玻璃,造成检测池泄漏。

2、氘灯:氘灯正常使用寿命可在1500小时以上。灯的使用寿命与检测器的使用时间和开启频率有关,因此使用过程中应尽量节省不必要的开机时间,减少开关频率,以延长氘灯的使用寿命。

如果地判断出氘灯已经不能点亮或能量太低,则需要更换新的氘灯。在购买氘灯时,应注意咨询和核对氘灯的型号与仪器型号是否匹配。更换到氘灯时,参照仪器说明书中的相关内容,特别要注意氘灯连接线的位置顺序。

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