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高效液相色谱仪结构简介及其应用

Date: 2020-04-26 9:35:15 * 浏览: 141
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液相色谱和气相色谱技术

一、高效液相色谱仪 的结构:

HPLC的出现不过三十多年的时间,但这种分离分析技术的发展十分迅猛,目前应用也十分广泛。其仪器结构和流程也多种多样。典型的高效液相色谱仪 结构和流程可用下列方框图表示(图3-2)。高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置(用双泵)、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。

1 、高压泵

HPLC使用的色谱柱是很细的(1~6mm),所用固定相的粒度也非常小(几μm到几十μm),所以流动相在柱中流动受到的阻力很大,在常压下,流动相流速十分缓慢,柱效低且费时。为了达到快速、高效分离,必须给流动相施加很大的压力,以加快其在柱中的流动速度。为此,须用高压泵进行高压输液。高压、高速是高效液相色谱的特点之一。

HPLC使用的高压泵应满足下列条件:

a 流量恒定,无脉动,并有较大的调节范围(一般为1~10ml/min);

b 能抗溶剂腐蚀;

c 有较高的输液压力;对一般分离,60×105Pa的压力就满足了,对高效分离,要求达到150~300×105Pa。

(1)往复式柱塞泵

当柱塞推入缸体时,泵头出口(上部)的单向阀打开,同时,流动相进入的单向阀(下部)关闭,这时就输出少量的流体。反之,当柱塞向外拉时,流动相入口的单向阀打开,出口的单向阀同时关闭,一定量的流动相就由其储液器吸入缸体中。这种泵的特点是不受整个色谱体系中其余部分阻力稍有变化的影响,连续供给恒定体积的流动相。

(2)气动放大泵

其工作原理是:压力为p1的低压气体推动大面积(SA )活塞A,则在小面积(SB )活塞B输出压力增大至p2的液体。压力增大的倍数取决于A和B两活塞的面积比,如果A与B的面积之比为50:1 ,则压力为5×105Pa的气体就可得到压力为250×105Pa的输出液体。这是一种恒压泵。

2 、梯度洗提

类似于GC中的程序升温。已成为现代高效液相色谱中不可缺少的部分。

梯度洗提,就是载液中含有两种(或更多)不同极性的溶剂,在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性,通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素,以提高分离效果。梯度洗提可以分为两种:

a 低压梯度(也叫外梯度):在常压下,预先按一定程序将两种或多种不同极性的溶剂混合后,再用一台高压泵输入色谱柱。